pH熒光探針

BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

pH熒光探針

產品關鍵詞

BCFL AM; BCECF, AM；Dual-excitation ratiometric pH indicator 雙激發光比率型pH熒光探針；SBFI AM ( Na⁺ Indicator)；Fluo-8, AM； 

產品信息

產品描述

BCFL AM是一種細胞膜滲透性的熒光探針，用來測定相對的胞內pH變化。是常用的比率型pH探針-BCECF（2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein）的優越替代物。與BCECF不同（至少由三種異構體構成的一種復合物，不同異構體之間的比率因批次而異），BCFL是單一異構體，具有更好的的結果重復性。BCFL具有與BCECF相同的光譜反應（單波長測定λex/λem=490/535nm；或比率測定λex/λem=505/ 535nm和λex/λem=430/535nm）（光譜特征見附錄I）。BCFL AM表現出pH依賴的雙激發性，pKa~7.0，以及一個激發交點（454nm）。BCFL AM的比率型成像使得胞內pH測定基本不受幾種可變因素的影響，包括染料濃度、光徑、細胞泄露和光漂白率。

產品特性

1） 同義名：BCFL AM ester; BCFL Acetoxymethyl Ester;

2） 分子量：~600

3） 溶解性：溶于DMSO

4） Ex/Em：503/528nm

注意事項

1）熒光染料都存在淬滅問題，操作或保存過程中盡量避光，減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

A、試劑準備

1. 10% Pluronic F-127母液配制【可選】

a）將1g Pluronic F-127（貨號：MS4301-1G）溶于10ml去離子水，配制成10%（w/v）母液。

b）溶解過程中于40~50℃內加熱10% Pluronic F-127母液30min，使其*溶解。

c）10% Pluronic F-127母液室溫保存，高達6個月穩定，不要凍存。

2. HHBS Buffer（貨號：MS3510-500ML）或其他生理緩沖液

3. 丙磺舒（貨號：MZ8471-1G）或水溶性丙磺舒（貨號：MZ8472-154MG）【可選】

B、操作步驟

【注意】：以下實驗步驟中用到非離子表面活性劑Pluronic F-127和有機陰離子轉運抑制劑丙磺舒（Probenecid），這兩種試劑雖然都是非必需的，但強力推薦使用。

1. 制備BCFL AM母液：于實驗前，將低溫保存的BCFL AM粉末（Mw：~600）置于室溫回溫至少20min。低速離心后加入高質量無水DMSO配制成10~20mM母液。比如：1mg BCFL AM粉末加入166μl DMSO充分溶解，混勻后即得到10mM母液。多余的母液根據單次用量分裝，避光凍存，約3個月穩定

2. 用HHBS或其他的生理緩沖液制備2×工作液（含10μM BCFL AM和0.08% Pluronic F-127），比如，在合適的管子內混合6.4μl BCFL AM（10mM 儲存液）和51.2μl 10% Pluronic F-127。之后，添加HHBS或其他生理緩沖液直到總體積為6.4ml。

【注意】：對于大部分的細胞系，建議BCFL AM的工作濃度為4~5μM。Pluronic F-127的終濃度建議為0.02~0.04%。

3. 吸取100μl 2×工作液到含100μl 細胞培養基的培養孔內，混勻，使得BCFL AM的終濃度為5μM和Pluronic F-127的終濃度為0.04%。

4. 置于37℃孵育30~60min。之后置于室溫孵育30min。

5. 吸走200μl染色液，之后重新加入含1mM丙磺舒的HHBS Buffer或其他生理緩沖液。

6. 添加化合物到檢測孔內。之后通過熒光檢測來進行pH分析?！締尾ㄩL檢測：Ex/Em=490/535nm（cutoff=515nm）；或比率測定Ex/Em=505/535nm和430/535nm（cutoff=515nm）】

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附錄 BCFL探針pH依賴性的光譜特征。A）吸收光譜；B）發射光譜；C）激發光譜；圖A）表明BCFL在pH4.5-9.0范圍內的吸收光譜往紅光遷移（450nm→505nm），且摩爾吸光系數增加到約90,000 cm^-1M^-1，反映了BCFL具pH敏感性的吸收特征。圖B）表明BCFL在生理pH6-8范圍內的發射光譜。與BCECF相似，BCFL在生理范圍內的發射波長為526nm。圖C）說明BCFL作為雙激發比率型pH指示劑，具有激發等消光點（430nm）。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

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